宿主细胞DNA的来源

宿主细胞在生物制品的研发与生产中扮演着至关重要的角色。许多生物制品，例如传统疫苗、重组蛋白、抗体药物、细胞治疗、基因治疗及mRNA相关产品，通常使用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、非洲绿猴肾细胞（Vero）、人胚肾细胞（HEK293）、大肠杆菌（Ecoli）和酵母等作为载体。通过阴离子交换层析等下游纯化工艺，宿主细胞DNA（Host Cell DNA，HCD）会被去除，但仍然可能存在微量残留。这些外源DNA可能引起潜在的免疫原性和安全性问题，因此HCD检测已成为生物制品生产中的重要质量控制指标之一。

HCD检测的重要性

宿主细胞残留DNA在体内可能导致多种不良后果，包括：

• 致癌性：外源DNA可能引入致癌基因，促进某些细胞转变为肿瘤细胞。此外，残留的宿主细胞核酸可能导致细胞增殖失控，形成肿瘤。
• 感染性：宿主细胞DNA可能包含致病病毒基因，通过复制和转录扩增，引发感染性病毒粒子的产生。
• 提高免疫源性：宿主细胞DNA中的CpG富集，可能通过Toll样受体（TLR）引发免疫反应。
• 潜在重组风险：宿主细胞基因组内的LTR可能与细胞原癌基因相互作用，激活这些基因，从而导致正常细胞转化为癌细胞。

HCD的检测方法

根据《中国药典》2020年版通则3407，外源性DNA残留测定主要包括三种方法：DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法。

DNA探针杂交法将样品中的外源DNA加热变性为单链并吸附于固相膜，之后与特异性标记的单链DNA发生杂交。在与已知含量阳性对照比较后，显色深度与DNA量成正比。这种方法在DNA含量低于10pg时，化学物质对结果的影响显著，并且检测结果的稳定性较差。

荧光染色法利用双链DNA荧光染料，与双链DNA结合形成复合物。在480nm波长激发下产生荧光信号，并在520nm检测。荧光强度与DNA浓度成正比，但易受干扰，需避免环境和耗材的DNase污染。

定量PCR法则通过设计特异性引物和带有荧光标记的探针对宿主细胞DNA进行检测。其高灵敏度使得能够准确定量痕量残留DNA。定量PCR法是中国药典确认的外源性DNA残留测定方法，也是新版USP中推荐的生物制品检测标准。

宿主细胞残留DNA标准产品特性

尊龙凯时推出全新的宿主残留DNA检测产品，覆盖多种细胞类型，包括CHO、Ecoli、Vero、HEK293。此检测试剂盒中引物和探针序列均来源于药典，无需进行整套验证实验，仅需确认方法即可。根据定量PCR方法开发的试剂盒，其检测限（LOD）可达到0.0003 pg/μL，并且与其他DNA无交叉反应，从而大幅减少假阳性。我们的严格生产管理体系确保批间差异可控，CV<10%。

尊龙凯时提供手动提取和自动化仪器提取的整套解决方案，快速完成检测流程，并保证定量结果的准确性。我们的性能数据符合国家标准，产品的品质和稳定性从实际样本测试中得到了验证。全自动提取设备与预封装试剂盒的组合，使得检测过程方便快捷，满足各种实验室的需求。

参考文献：

• 体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则(试行)，国家药品监督管理局药品审评中心，2022年05月
• 国家药典委员会，中华人民共和国药典（2020年版）
• 闫璐瑶、张家友、杨晓明，生物制品中宿主细胞残留DNA检测的研究进展[J]，国际生物制品学杂志，2021, 44(3): 170-174