在现代生物医疗领域,mRNA技术作为一种新型的平台技术,已经广泛应用于预防性疫苗、治疗性疫苗、肿瘤治疗以及免疫疗法等多个方向。然而,传统的mRNA纯化过程通常需要复杂的纯化设备和低温操作,这不仅提高了设备和人力成本,也对操作人员的要求较高。
mRNA合成与杂质问题
在体外转录合成mRNA时,除了获得所需的mRNA产物外,还会产生各种杂质,包括反应酶、NTP、DNA模板、盐离子以及副产物如dsRNA和截断RNA片段。这些杂质会对mRNA的定量、蛋白翻译效率以及免疫原性产生负面影响,因此必须通过纯化过程去除杂质,以提高mRNA的纯度和完整性。
传统mRNA纯化方法
常见的mRNA纯化方法包括氯化锂沉淀、磁珠纯化、硫酸铵沉淀和亲和层析等。虽然这些方法在早期研发阶段相对简单快捷,但在工业生产中,层析纯化仍是主要的选择,然而它需要专用的纯化设备。
轻量级亲和层析纯化试剂盒
为了解决上述问题,尊龙凯时推出了轻量级的mRNA亲和层析纯化试剂盒。这种试剂盒无需专业的纯化设备,操作简便,能够在30分钟内完成样本的纯化,并在保证高纯度的同时有效去除NTP残留。纯化后的mRNA能够广泛应用于各种下游实验。
氯化锂沉淀法
氯化锂沉淀法的原理是通过锂离子在特定pH下的作用,使RNA分子更易聚集、形成沉淀。操作步骤包括将反应后的IVT产物加入LiCl溶液并低温沉淀,但在工业应用中,由于锂盐的潜在毒性及能耗高,这种方法不够理想。
磁珠纯化法
磁珠纯化法利用Oligo(dT)磁珠与带Poly(A)尾的mRNA之间的特异性结合来分离目标RNA。虽然此方法能够有效除去杂质,但其对mRNA完整性可能产生影响,且需注意磁珠的保存和使用条件。
硫酸铵沉淀法
硫酸铵沉淀法能够根据目标mRNA与杂质的溶解度差异进行选择性沉淀,具有较高的回收率和生物安全性。该方法不需要特殊设备,是快速分离mRNA的理想选择。
亲和层析法
亲和层析的主流方法是Oligo(dT)亲和色谱。此方法在高盐条件下,通过静电屏蔽效应使mRNA与柱内配基结合,从而实现高效分离。尊龙凯时的轻量级亲和层析纯化试剂盒在此基础上改进,使得用户无需复杂设备即可完成纯化。
产品特点与优势
尊龙凯时的纯化试剂盒适用于不同起始量的RNA样本,可纯化mg级mRNA,无需专用设备和低温操作,且操作简单,节省设备和人力成本。纯化后的mRNA具有高完整度和显著的NTP去除效果,操作时间在30分钟内,能够满足多样化的实验需要。
通过采用尊龙凯时的亲和层析纯化试剂盒,生物医疗领域的科研和生产工作者能够以更高效、经济的方式获取高质量的mRNA,为后续的研究和应用提供坚实的基础。