在生物医学领域，甘油菌种的复苏与保存是确保实验可靠性和结果一致性的关键环节。此过程包括菌种的保存、复苏及后续保存，下面将详细介绍相关步骤与注意事项。

菌种保存

首先，将菌种接种到LB液体培养基中，并需要在对数生长期进行保存，通常在观察到培养体系浑浊可见时可以进行保存。接着，准备50%浓度的甘油溶液，可以通过等体积的蒸馏水与甘油混合获得。在无菌条件下，将菌液与50%浓度的甘油以1:1的比例混合，以保证甘油的终浓度达到25%。将混合液转移到2ml离心管中，并在-20°C的冰箱中保存。在这种条件下，菌种的保存有效期为1年；若需要长期保存，建议在-70°C或-80°C的环境中冻存，保存期限可达到2-4年。

菌种复苏

在使用甘油保存的菌种之前，应将其在30°C的水浴中解冻。解冻后，将菌液接种到固体培养基上，并在适宜的生长条件下培养24-48小时，以恢复菌种的活性。这一复苏过程是确保后续实验成功的基础。

再次保存

复苏后的菌种应在新的液体培养基中继续培养，然后再次进行甘油保存。这样可以确保菌种的长期保存和随时可用，为生物医学研究提供了强有力的支持。

注意事项

在整个操作过程中，需确保所有使用的工具与容器经过适当的灭菌处理，以避免污染。同时，保持无菌环境以防外部微生物的干扰。正确的保存与复苏方法对保持菌种的活性和纯度至关重要。存储温度对菌种的长期存活有显著影响，低温条件有助于延长保存期限。通过这些操作，可以有效提高实验的可靠性，确保您的研究成果达到最佳效果，助力您在生物医学领域的成功实现。

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