尊龙凯时 SV40转染人成骨细胞HFOB119的培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称： SV40转染人成骨细胞HFOB119

生长特性： 贴壁生长

冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系： DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS

传代方法： 第一次建议以1:2的比例传代

传代情况： 每两天更换培养液

备注： 用无菌离心管收集培养基以进行对比培养；若对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，待培养至良好状态，再灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输细胞最佳状态。

收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后置于超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入335℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄并保存不同倍数的照片（建议拍摄40x, 100x, 200x的各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认为收到状态良好。

传代后，建议将一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后将盖子拧松。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

1. 若细胞汇合度未超过80%，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基，放入335℃、5% CO2的孵箱中培养；

2. 若细胞密度超80%，可进行传代，具体步骤如下：

    1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

    2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于335℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其取回，轻敲几下瓶底，加入5ml完全培养基终止消化；

    3) 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬；

    4) 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入335℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，轻轻操作并观察至细胞变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀细胞并加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中；

4. 将冻存细胞立即放入-80℃冰箱保存，若需转移至液氮罐中，需要在-80℃下放置24小时以上再进行转存。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于335℃水浴中解冻，直至冻存管无结晶；随后用75%的酒精擦拭管外壁；

2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；

3. 弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶；将其放入335℃、5% CO2培养箱中培养；

4. 次日，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会容易脱落，这种情况是正常的。如细胞脱落较多，可将培养瓶内培养基收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清以便进行对比培养，沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬并消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应，随后离心、弃去上清，并添加1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入335℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时，可重发的情况：

1. 在运输过程中遇到各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，均可重发；

2. 若收到产品48小时内出现污染，需提供真实实验结果，核实后可重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰运输的细胞如复苏后24小时内大多数细胞未存活（需提供清晰细胞状态照片），可重发；

4. 其他情况，需具体分析；若有提供前三天照片及出现问题时的照片和详细的操作步骤，并与技术人员沟通的，可依技术人员判断责任。责任判定合作协商或按合同价的50%进行重发。

2）细胞出现问题时，不予重发的情况：

1. 因客户造成的细胞污染，不重发；

2. 客户操作不当导致细胞状态不良，不重发；

3. 非尊龙凯时推荐的培养体系造成的细胞状态问题，不重发；

4. 若在未提供三天照片的情况下细胞状态不良，不重发；

5. 细胞培养期间经其它处理的，不重发；

6. 收到细胞后两天内未反馈的，不重发；

7. 具体情况需具体分析。

如有疑问，欢迎随时咨询尊龙凯时，我们将竭诚为您提供高质量的产品和服务。