尊龙凯时提供的人胃癌细胞MGC803培养指导手册，旨在帮助科研人员掌握细胞培养的最佳实践。以下是该细胞的培养条件和操作步骤。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P
传代方法：第一次推荐1:2的比例进行传代。请注意，每2天对培养基进行更换。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态，并灌满完全培养液，确保瓶口封闭，这是运输细胞的最佳方式。用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内以无菌方式操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中，静置3-4小时以恢复细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，并对不同倍数进行拍照保存（建议拍摄40x, 100x, 200x的照片），前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。建议进行对比培养，将一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，并在换液后将瓶盖拧松。

三、细胞培养步骤

a.细胞传代

1. 若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并置于37℃、5% CO2的培养箱中。
2. 若细胞密度超过80%，请按以下步骤进行传代：
    （1）丢弃培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS对细胞洗涤1-2次。
    （2）加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液于培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞变圆并开始脱落，迅速将其移至操作台，轻轻敲打培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
    （3）轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml的完全培养基中。
    （4）按照1:2的比例进行传代，补充5-8ml的完全培养基至两个T25瓶中，并置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b.细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，丢弃培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶，观察细胞状态，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打后转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后置于冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃的冰箱中，若后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上。

c.细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精消毒冻存管外壁。
2. 转移解冻后的细胞至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，并接种至T25培养瓶中，放入37℃，5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会发生脱落，属于正常现象。如脱落较多，可将所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，为后期培养提供基础。重悬细胞后可进行分瓶传代操作。

五、售后条款

1. 细胞出现问题时的重发情况：（a）运输中遭遇问题，如细胞丢失、瓶身破损等，可重发；（b）细胞污染需在48小时内提供实验结果，核实后重发；（c）常温发货细胞在静置24小时后，及干冰发货细胞复苏后24小时内若细胞未存活，需提供真实照片重发；（d）细胞活性问题需在7天内提供活力检验结果，以便核实重发。
2. 细胞出现问题但不予重发的情况包括：（a）客户造成的污染；（b）不当操作导致细胞状态不佳；（c）使用非推荐培养体系导致问题等。

尊龙凯时致力于提供优质的细胞培养解决方案，确保科研工作的顺利进行。