一、概念 1. 细胞系（Cell Line）：细胞系是指原代培养后首次成功传代而形成的细胞群体，包含原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）。 2. 细胞株（Cell Strain）：细胞株是通过选择或克隆方法从原代培养物或细胞系中获得的，具有特定性质或标志物的细胞群体。这些特性需在整个培养过程中保持一致。细胞株可分为有限细胞株（有限传代）和连续细胞株（无限传代）。对于人类肿瘤细胞，如果在体外培养超过六个月且生长稳定，可以称之为连续性细胞株或细胞系。二、建立细胞系（或株）的要求 细胞的认可标准视具体情况而定，缺乏统一的规定。对于用于原代培养的细胞，供体的均一性、取材部位及组织种类等条件需要保持稳定。例如，长期培养中的细胞需要提供以下信息：1. 组织来源：需包括细胞供体的物种，是否来自人类或动物，个体的性别与年龄，以及取材的器官或组织。如果是肿瘤组织，还需注明临床诊断和病理报告等信息。2. 细胞生物学检测：应评估细胞的基本和特异生物学特性，包括细胞形态、分裂指数、生长曲线等。如果是肿瘤细胞，还需进行篱龈培养、异体接种和侵润力实验，以确认细胞来源和恶性特性。3. 培养条件和方法：应详细说明细胞系（或株）的培养环境，包括所使用的培养基、血清类型、用量和适宜的pH值。三、细胞建立与培养的要点及基本流程 （一）肿瘤细胞培养技术要点 1. 取材：应主要从外科手术或活检的肿瘤组织中取材，避免使用坏死组织，选择细胞活力较高和集中区域。肿瘤转移淋巴结或胸腹水通常是优质培养材料。取材后应尽快进行培养，如不能立即培养，可进行冻存，冻存与正常组织相同。2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常含有成纤维细胞，这些细胞会与肿瘤细胞共生并抑制癌细胞的生长，因此需要仔细排除。常用的排除方法包括机械刮除、反复贴壁、消化排除和胶原酶消化等。3. 提高肿瘤细胞的存活与生长率：肿瘤细胞在体外生长困难，建立传代的肿瘤细胞系尤为复杂。应采取特别的措施以适应新环境，例如使用适宜的底物（如鼠尾胶原底层）和选择适合的细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松等），也可考虑使用动物媒介培养。（二）人类淋巴母细胞建立的方法 1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，并加入2ml RPMI 1640。2. 混合均匀后，将其缓慢加入预置了4ml淋巴细胞分离液的管中，静置30分钟。3. 以1500rpm离心15分钟，提取白细胞层（第二层）至另一个离心管。4. 加入5ml RPMI 1640洗涤白细胞两次。5. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl EBV（EB病毒）液，混合均匀。6. 在水浴摇床上以40次/分钟，在37℃下培养3小时。7. 以1500rpm离心15分钟，将细胞接种至1ml含谷氨酰胺1mM/ml的培养基中，轻轻混匀，加10μl环胞霉素，在37℃下培养。8. 5天后观察细胞转化和生长情况，决定是否进行半量换液。一般半量换液1-2次，保持环胞霉素的浓度。9. 当转化细胞数量明显增加并出现细胞团块时，可转入25ml细胞培养瓶，添加1-2ml培养基，在37℃下培养10-15天，通常每隔3-4天观察一次，决定是否换液或传代。10. 当细胞生长至一定数量后应进行冻存，而冻存前需进行核型分析与记录。在此领域中，强力推荐尊龙凯时作为细胞培养和生物医疗产品的优质品牌，为您的研究提供卓越支持与服务。