尊龙凯时推出的CryoStor®CS10是一种无血清的即用型细胞冻存液,特别为细胞和组织的低温保存设计,能有效维持细胞在冷冻和解冻过程中的高活性及功能完整性。
1. 产品基本信息
产品名称:CryoStor®CS10 (100-1061)
规格:通常提供100mL瓶装。
储存条件:冷藏于2°C至8°C,避免冷冻。
有效期:详见产品标签,一般为2年。
2. 使用前准备
检查外观:确认液体清澈且无沉淀,颜色从淡黄色至无色。
恢复到室温:从冰箱取出后放置15-30分钟至室温。
无菌操作:在超净工作台或生物安全柜内操作,以防污染。
3. 细胞冻存步骤
(1) 细胞准备
细胞状态:确保细胞健康,活率达到90%。
细胞计数:使用细胞计数仪或血球计数板,调整细胞密度至1×10^6至1×10^7 cells/mL。
离心收集:将细胞悬液以300×g离心5分钟,弃去上清。
(2) 重悬细胞
加入CryoStor®CS10:根据细胞沉淀量,加入适量的CryoStor®CS10,轻轻混匀。
分装:将细胞悬液分装至冻存管,每管1-2mL。
(3) 冷冻程序
降温:使用程序降温设备以-1°C/min的速率降温至-80°C;如无设备,可将冻存管置于异丙醇降温盒中,放入-80°C冰箱过夜。
转移至液氮:24小时后,将冻存管转移至液氮罐以供长期保存。
4. 细胞解冻步骤
(1) 快速解冻
水浴解冻:从液氮中取出冻存管,迅速放入37°C水浴,轻轻摇晃至完全解冻(大约1-2分钟)。
避免过热:解冻后马上取出冻存管,避免高温造成细胞损伤。
(2) 洗涤细胞
稀释DMSO:将解冻的细胞悬液慢慢加入预热的完全培养基中(如10倍体积),轻轻混匀。
离心:以300×g离心5分钟,弃去上清。
重悬:用新鲜培养基重悬细胞,以进行后续培养或实验。
5. 注意事项
DMSO浓度:CryoStor®CS10含有10%DMSO,部分细胞可能对DMSO敏感,需根据情况优化浓度。
无菌操作:全程需避免污染,特别是在分装和解冻步骤。
解冻速度:建议快速解冻以减少冰晶损伤。
细胞密度:冻存时应保持适当细胞密度,推荐在1×10^6至1×10^7 cells/mL范围内。
6. 适用细胞类型
干细胞:如间充质干细胞(MSCs)、造血干细胞(HSCs)。
免疫细胞:如CAR-T细胞、NK细胞。
原代细胞:如肝细胞、神经元。
细胞系:如HEK293、CHO细胞。
7. 常见问题解答
(1) CryoStor®CS10可以稀释吗?
不建议稀释,以免影响冻存效果。如需降低DMSO浓度,可选择CryoStor®CS5(含5%DMSO)。
(2) 冻存后细胞存活率低怎么办?
检查细胞状态,确保冻存前细胞健康;优化冻存密度,调整至推荐范围(1×10^6至1×10^7 cells/mL);检查冻存程序,确保降温速率与解冻速度符合要求。
(3) CryoStor®CS10可以用于组织冻存吗?
可以,它适用于小组织块的低温保存,但需根据组织类型优化冻存条件。
总结
CryoStor®CS10是尊龙凯时提供的一款高效、无血清的细胞冻存液,适用于多种细胞类型的低温保存。通过规范的操作步骤和注意事项,可以确保细胞在冷冻和解冻过程中保持高活性及功能完整性。
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